产品介绍
DNA羟甲基化是一种重要的表观遗传修饰，对基因的表达起调控作用，在神经分化和癌症中发挥重要的作用。然而，基于传统的重亚硫酸盐方法无法区分5-hmC和5-mC。星火基因科技建立了化学氧化法结合重亚硫酸盐转化的测序技术（oxidative bisulfite sequencing, oxBS-Seq），该技术不仅可以精确检测DNA甲基化，排除DNA羟甲基化的影响，还可以同时进行单碱基分辨精确检测DNA羟甲基化。
BS转化无法区分5mC和5hmC
传统的Bisulfite测序中，5hmC经过Bisulfite处理后变为CMS,CMS在测序中仍然被读作C碱基，因此不能区分5mC和5hmC。
oxBS-Seq技术原理
oxBS-Seq将5hmC氧化为5fC，后者可以被Bisulfite转为U。从而实现5mC的精准检测；同时，经过与常规Bisulfite结果比较可以实现对5hmC的准确检测。
技术优势
1.DNA甲基化检测全新的“金标准”
2.全基因组单碱基检测DNA羟甲基化修饰
3.多重标准验证高氧化效率和高Bisulfite转换率
4.实验偏好性低，重复性高（R²>0.98）
5.可满足多种测序应用需求：简化基因组氧化甲基化测序（oxRRBS），目标区域氧化甲基化测序（Target-oxBS）
实验策略
信息分析
技术参数
| 样本要求 | 项目周期 |
| 样品类型：无降解，无污染的 DNA 样品； 样品需求量：≥不同样本需求不同，人类样本≥ 3μg；样品浓度：≥30 ng/μl 样品纯度：OD260/280=1.8~2.0 | 15个样本以下标准运转周期约为45个工作日，大样本量项目需分批建库，项目周期需要与技术支持人员确定。 |
案例分析
案例：
OxBS 技术单碱基检测 5mC和5hmC 在鼠胚胎干细胞中的水平
Booth, M. J., et al. (2012). Quantitative sequencing of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine at single-base resolution. Science 336(6083): 934-937.
背景：
随着5hmC 在哺乳动物基因组中的发现，传统的bisulfite 测序已不能精确区分5mC和5hmC的修饰差异，传统BS的测序结果中，5mC的修饰水平实际是 5mC和5hmC两者信号的合集，建立一种精确区分两者的实验技术迫在眉睫。
方法：
利用oxBS测序技术对小鼠胚胎干细胞DNA甲基化和羟甲基化进行检测和定量。
结论：
本研究首次建立了通过化学氧化结合重亚硫酸盐处理的实验技术。该技术首先将5hmC氧化为5fC，进而可被重亚硫酸盐转换成U，从而排除了5hmC对5mC的信号干扰，达到精确检测基因组5mC的目的。运用该技术对小鼠胚胎干细胞的研究发现，5hmC在CGI相关的转录调控区域和LINE1元件中含量较高，表明其对表观重编程可能起到重要作用。
5mC和5hmC在小鼠胚胎干细胞基因组不同元件的百分量
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