产品介绍
简化甲基化测序(Reduced Representation Bisulfite Sequencing, RRBS)是利用限制性内切酶对基因组进行酶切，富集启动子及CpG岛等重要的表观调控区域并进行重亚硫酸盐测序。该技术显著提高了高CpG区域的测序深度，在CpG岛、启动子区域和增强子元件区域可以获得高精度的分辨率，是一种准确、高效、经济的DNA甲基化研究方法；在大规模临床样本的研究中具有广泛的应用前景。为了适应科研技术的需要，我们进一步开发了可在更大区域内捕获 CpG位点的双酶切RRBS(dRRBS)，可研究更广泛区域的甲基化，包括 CGI shore等区域。
技术优势
1.精确度高
在其覆盖范围内可达到单碱基分辨率
2.重复性好
多样本的覆盖区域重复性可达到85%-95%，适用于多样本间的差异分析
3.性价比高
测序区域针对高CpG区域，数据利用率更高
实验策略
信息分析
技术参数
| 样本要求 | 项目周期 |
| 总量：不同样本需求不同，人类样本≥ 2μg；纯度： OD260/280 = 1.8~2.0；完整性：DNA无明显降解，需提供凝胶电泳检测胶图。推荐数据量： 10G clean data | 15个样本以下标准流程的运转周期约为60个工作日。样品数较多时，项目周期需要与技术支持人员确定。 |
案例分析
案例：
DNA甲基化的改变对癌症细胞侵袭能力的影响
Antje Hascher, et al. (2013) DNA Methyltrans-ferase Inhibition Reverses Epigenetically Embedded Phenotypes in Lung Cancer Preferentially Affecting Polycomb Target Genes. Clin Cancer Res; 20(4); 814–26.
背景：
癌细胞的表型在一定程度上由表观决定，比如DNA甲基化。癌症发展后期的转移特性可能与表观遗传修饰的改变有关。
方法：
利用RRBS技术检测具有高侵袭性的非小细胞肺癌细胞系(A549和HTB56)以及相应经过甲基化抑制剂氮杂胞苷（azacytidine）处理过的细胞系的甲基化修饰。探讨甲基化的改变对肺癌细胞系的侵袭能力的影响。
结论：
高侵袭性细胞系在发展过程中，DNA甲基化修饰发生了广泛的改变。同低侵袭能力的细胞系相比，RRBS检测到的CpG富集的区域中有2.5%的区域发生了差异修饰。当使用了DNA甲基化抑制剂azacytidine，伴随着这些高甲基化修饰的位点出现甲基化修饰的丢失，细胞系的侵袭能力也发生了逆转。
5-Azacytidine诱导的侵袭能力逆转
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