产品介绍
染色质免疫共沉淀测序(CHIP-Seq)是将ChIP与高通量测序技术相结合的ChIP-Seq技术,可在全基因组范围对特定蛋白的DNA结合位点进行高效而准确的筛选与鉴定。不同组蛋白的差异性修饰与基因的转录、染色质的空间构型和构象密切相关。运用某一修饰的特定组蛋白的特异性抗体富集与其结合的DNA片段,并进行纯化和文库构建,然后进行高通量测序,通过将获得的数据与参考基因组精确比对,研究人员可获得全基因组范围内某种修饰类型的特定组蛋白与基因组DNA序列之间的关系,也可对多个样品进行差异比较。
技术优势
1.筛选范围广
全基因组范围内筛选特定组蛋白修饰与基因组DNA序列之间的关系
2.微量样本
只需5ng以上免疫沉淀后的DNA,即可展开测序分析
3.方案灵活
根据不同的项目需求,选择不同的组蛋白修饰特异性抗体技术参数
实验方案

信息分析

样本参数
样本要求 | 项目周期 |
类型:DNA 样品、细胞、或组织;总量:≥ 10 ng ChIP 7 ed DNA(人类样本可以低至5ng)或≥10 的细胞量;DNA片段大小:分布在100~500 bp范围,且主带明显。需提供DNA打断后的检测胶图;ChIP标准抗体:H3K4Me3,H3K4Me2,H3K9Me3,H3K9Me2,H3K27Me3,H3K27Me2等推荐数据量 :20M~40M clean reads。 | 25个以下的免疫沉淀后的DNA样品,标准流程(仅包括标准信息分析)的运转周期约为30个工作日;12个以下的细胞系样品,标准流程(仅包括标准信息分析)的运转周期约为50个工作日;样品数更多时,项目周期根据项目规模而定。 |
案例分析
案例:
组蛋白修饰与改变抗原特异性T细胞应答有关
XM Yang, et al. (2014)Histone modifications are associated with Delta(9)-tetrahydrocannabinol-mediated alterations in antigen- specific T cell responses. J Biol Chem. 2014 May 19. pij: jbc. M113. 545210.
背景:
大麻是一种毒品,但是它也可以用作药用,在大麻的成分中,Δ9四氢大麻酚还有消炎药的功效,Δ9四氢大麻酚的免疫调节是否受到表观因素的调控以前还没有研究过。
方法:
利用ChIP-Seq技术研究组蛋白修饰在Δ9四氢大麻酚介导的抗原特异性T细胞应答中的变化。这里用到的抗体共五种,包括H3K4, H3K27, H3K9, H3K36 tri-methylation和H3K9ac。
结论:
结果显示,很大部分组蛋白的甲基化和乙酰化的区域都被THC(Δ9四氢大麻酚)改变了,THC激活一部分的基因,同时又会通过组蛋白调节抑制另一部分基因的表达。这些组蛋白标记相关的功能聚类分析显示这些不同的相关的基因和各种细胞功能有关,从细胞周期调节到新陈代谢,THC 通过调节组蛋白修饰来调节免疫反应。

淋巴节点细胞中H3组蛋白的分布激活淋巴节点细胞中H3组蛋白甲基化区域的分布